3 第一法高效液相色譜法（HPLC）
3.1 原理
試樣用三氯乙酸溶液-乙腈提取，經陽離子交換固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜測定，外標法定量。
3.2 試劑與材料
除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。
3.2.1 甲醇：色譜純。
3.2.2 乙腈：色譜純。
3.2.3 氨水：含量為25％～28％。
3.2.4 三氯乙酸。
3.2.5 檸檬酸。
3.2.6 辛烷磺酸鈉：色譜純。
3.2.7 甲醇水溶液：準確量取50 mL 甲醇和50 mL 水，混勻后備用。
3.2.8 三氯乙酸溶液（1％）：準確稱取10 g 三氯乙酸于1 L 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用。
3.2.9 氨化甲醇溶液（5％）：準確量取5 mL 氨水和95 mL 甲醇，混勻后備用。
3.2.10 離子對試劑緩沖液：準確稱取2.10 g 檸檬酸和2.16 g 辛烷磺酸鈉，加入約980 mL 水溶解，調節pH 至3.0 后，定容至1L 備用。
3.2.11 三聚氰胺標準品：CAS 108-78-01，純度大于99.0%。
3.2.12 三聚氰胺標準儲備液：準確稱取100 mg（精確到0.1 mg）三聚氰胺標準品于100 mL 容量瓶中，用甲醇水溶液（3.2.7）溶解并定容至刻度，配制成濃度為1 mg/mL 的標準儲備液，于4℃避光保存。
3.2.13 陽離子交換固相萃取柱：混合型陽離子交換固相萃取柱，基質為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60 mg，3 mL，或相當者。使用前依次用3 mL 甲醇、5 mL 水活化。
3.2.14 定性濾紙。
3.2.15 海砂：化學純，粒度0.65 mm～0.85 mm，二氧化硅（SiO2）含量為99％。
3.2.16 微孔濾膜：0.2 μm，有機相。
3.2.17 氮氣：純度大于等于99.999％。
3.3 儀器和設備
3.3.1 高效液相色譜（HPLC）儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
3.3.2 分析天平：感量為0.0001 g和0.01 g。
3.3.3 離心機：轉速不低于4000 r/min。
3.3.4 超聲波水浴。
3.3.5 固相萃取裝置。
3.3.6 氮氣吹干儀。
3.3.7 渦旋混合器。
3.3.8 具塞塑料離心管：50 mL。
3.3.9 研缽。
3.4 樣品處理
3.4.1 提取
3.4.1.1 液態奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等
稱取2 g（精確至0.01 g）試樣于50 mL具塞塑料離心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液（3.2.8）和5 mL乙腈，超聲提取10 min，再振蕩提取10 min后，以不低于4000 r/min離心10 min。上清液經三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容至25 mL，移取5 mL濾液，加入5 mL水混勻后做待凈化液。
3.4.1.2 奶酪、奶油和巧克力等
稱取2 g（精確至0.01 g）試樣于研缽中，加入適量海砂（試樣質量的4倍～6倍）研磨成干粉狀，轉移至50 mL具塞塑料離心管中，用15 mL三氯乙酸溶液（3.2.8）分數次清洗研缽，清洗液轉入離心管中，再往離心管中加入5 mL乙腈，余下操作同3.4.1.1中“超聲提取10 min，……加入5 mL水混勻后做待凈化液”。
注：若樣品中脂肪含量較高，可以用三氯乙酸溶液飽和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱凈化。
3.4.2 凈化
將3.4.1中的待凈化液轉移至固相萃取柱（3.2.13）中。依次用3 mL水和3 mL甲醇洗滌，抽至近干后，用6 mL氨化甲醇溶液（3.2.9）洗脫。整個固相萃取過程流速不超過1 mL/min。洗脫液于50℃下用氮氣吹干，殘留物（相當于0.4 g樣品）用1 mL流動相定容，渦旋混合1 min，過微孔濾膜（3.2.16）后，供HPLC測定。
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