附件1
手足口病標本采集及檢測技術方案
一、采集標本的種類、保存和運輸
（一）糞便標本。
采集病人發病3日內的糞便標本，用于病原檢測。糞便標本采集量5-8g/份，采集后立即放入無菌采便管內，外表貼上帶有唯一識別號碼的標簽，4℃暫存12小時內送達實驗室，-20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標本存于-70℃冰箱。
（二）咽拭子標本。
采集病人發病3日內的咽拭子標本，用于病原檢測。用專用采樣棉簽，適度用力拭抹咽后壁和兩側扁桃體部位，應避免觸及舌部；迅速將棉簽放入裝有3-5ml保存液（含5%牛血清維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的15ml外螺旋蓋采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥，外表貼上帶有唯一識別號碼的標簽。4℃暫存并在12小時內送達實驗室，-20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標本存于-70℃冰箱。
（三）血清標本。
各省（區、市）在手足口病流行年份中均應采集EV71 和CVA16感染的手足口病患兒的雙份血清。采集急性期（發病0-7d）和恢復期（發病14-30d）雙份配對血清用于闡明和分析EV71和CVA16感染后IgG和IgM抗體的動態變化，評價血清學抗體試劑盒的敏感性和特異性。靜脈采集3-5ml全血，置于真空無菌采血管中，自凝后，分離血清，將血清移到2ml外螺旋的血清保存管中，外表貼上帶有唯一識別號碼的標簽。將血清置于-20℃以下冰箱中冷凍保存。
（四）皰疹液。
在手足口病的實驗室診斷中，從皰疹液中分離到病毒即可確診該病毒為病因，可同時采集多個皰疹作為一份標本。先用75%的酒精對皰疹周圍的皮膚進行消毒，然后用消毒針將皰疹挑破用棉簽蘸取皰疹液，迅速將棉簽放入內裝有3-5ml保存液（含5%牛血清維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，采樣管外表貼上帶有唯一識別號碼的標簽。所采集標本4℃暫存立即（12h內）送達實驗室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標本存于－70℃冰箱。
（五）肛拭子標本。
采集病人發病3日內的肛拭子標本，用于病原檢測。用專用采樣棉簽，從患兒肛門輕輕插入，適度用力弧型左右擦拭數下，拔出后,迅速將棉簽放入裝有3－5ml保存液（含5%牛血清細胞維持液）的15ml外螺旋的采樣管中，采樣管外表貼上帶有唯一識別號碼的標簽。在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋，并密封，以防干燥。
（六）尸檢標本。
采集腦、肺和腸淋巴結等重要組織標本，每一采集部位分別使用單獨的消毒器械。每種組織應多部位取材，每部位應取2-3份約5-10g的組織，淋巴結2個，分別置于15ml-50ml無菌的有外螺旋蓋的凍存管中，采樣管外表貼上帶有唯一識別號碼的標簽。
（七）腦脊液標本。
出現神經系統癥狀的病例，可采集腦脊液標本，進行病毒分離或核酸檢測。采集時間為出現神經系統癥狀后3天內，采集量為1.0-2.0ml。采集后立即裝入無菌帶墊圈的凍存管中，4℃暫存立即(12h內)送達實驗室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標本存于－70℃冰箱。但EV71感染神經系統時，很難在腦脊液中檢測到EV71病原。
臨床標本在運輸和貯存過程中要避免反復凍融。標本采集后要全程冷藏或冷凍保存和運輸，12小時內送達實驗室。依照《人間傳染的病原微生物名錄》，腸道病毒或潛在含有腸道病毒的標本按B類包裝，置于冷藏保存盒內運輸，盡量縮短運輸時間。可采用陸路或航空等多種運輸方式，但在運輸過程中應采取保護措施，避免強烈震動、重力擠壓等現象。在送到省、地、市級CDC實驗室時，包裝盒內應帶冰且包裝完整。在上送標本的同時，需附帶相關的《手足口病病例臨床標本采樣登記表》。
二、標本采集注意事項
在手足口病的實驗室診斷中，從皰疹液或腦脊液中分離到病毒即可診斷該病毒為病因。用于采集咽拭子的無菌拭子要放在標本保存液中，如含5%牛血清維持液。用于分子生物學診斷的標本采集與病毒分離標本的采集方法一樣。為了保證檢測結果的準確性和有效性，標本應在病例發病后盡早采集，盡快檢測。不能立即檢測的標本應冷凍保存。對于血清學診斷，急性期血清應該在發病后盡早采集，恢復期血清在發病兩周后采集。標本保存液的配置見下表：
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保存液
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Eagle`s液(MEM)
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80.5ml
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3%L-谷氨酰胺200mM
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1.0ml
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胎牛血清
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5.0ml
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7.5%NaHCO3溶液
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3.5ml
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青、鏈霉素
（各10000U/ml）
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10ml
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